Nederlânske ûndersikers kombinearje CRISPR en bioluminescence yn in eksperimintele test foarbesmetlike sykten

In nij ûntwikkele nachtlik proteïne kin de diagnoaze fan firale sykten fersnelle en ferienfâldigje, neffens ûndersikers yn Nederlân.
Harren stúdzje, woansdei publisearre yn ACS Publications, beskriuwt in gefoelige, ien-stap metoade foar it rappe analysearjen fan virale nukleïnesoeren en har uterlik mei gloeiende helder blauwe of griene aaiwiten.
De identifikaasje fan patogenen troch it opspoaren fan har nukleïnesûrfingerprinten is in wichtige strategy yn klinyske diagnoaze, biomedysk ûndersyk, en tafersjoch op iten en miljeufeiligens.De breed brûkte kwantitative polymerase kettingreaksje (PCR) tests binne heul gefoelich, mar fereaskje ferfine sample tarieding of ynterpretaasje fan resultaten, wêrtroch't se ûnpraktysk binne foar guon sûnenssoarchynstellingen as boarne-beheinde ynstellings.
Dizze groep út Nederlân is it resultaat fan in gearwurking tusken wittenskippers fan universiteiten en sikehûzen om in flugge, draachbere en maklik te brûken nukleïnesoerdiagnostyske metoade te ûntwikkeljen dy't yn in ferskaat oan ynstellings tapast wurde kin.
Se waarden ynspirearre troch fjoerflitsflitsen, fjoerflintergloeien en lytse stjerren fan akwatyske fytoplankton, allegear oandreaun troch in ferskynsel neamd bioluminescence.Dit glow-in-the-dark-effekt wurdt feroarsake troch in gemyske reaksje mei it luciferaseprotein.De wittenskippers opnommen luciferase aaiwiten yn sensoren dy't útstjit ljocht te fasilitearjen observaasje as se fine in doel.Hoewol dit dizze sensoren ideaal makket foar deteksje fan soarchpunt, misse se op it stuit de hege gefoelichheid dy't nedich is foar klinyske diagnostyske tests.Wylst de CRISPR-gene-bewurkingsmetoade dizze mooglikheid kin leverje, fereasket it in protte stappen en ekstra spesjalisearre apparatuer om it swakke sinjaal te detektearjen dat oanwêzich kin wêze yn komplekse, lawaaierige samples.
Undersikers hawwe in manier fûn om in CRISPR-relatearre proteïne te kombinearjen mei in bioluminescent sinjaal dat kin wurde ûntdutsen mei in ienfâldige digitale kamera.Om der wis fan te wêzen dat d'r genôch RNA- as DNA-monster wie foar analyse, útfierden de ûndersikers recombinase-polymerase-amplifikaasje (RPA), in ienfâldige technyk dy't wurket by in konstante temperatuer fan sawat 100 ° F.Se ûntwikkele in nij platfoarm neamd de Luminescent Nucleic Acid Sensor (LUNAS), wêryn de twa CRISPR/Cas9-proteïnen spesifyk binne foar ferskate oanlizzende dielen fan it virale genoom, elk mei in unyk luciferase-fragmint oan har boppe.
As it spesifike virale genoom de ûndersikers ûndersiikje oanwêzich is, bine twa CRISPR / Cas9-proteinen oan 'e doelnukleinsûrsekwinsje;se komme yn 'e buert, wêrtroch yntakt luciferaseprotein foarmje en blau ljocht útstjit yn 'e oanwêzigens fan in gemysk substraat..Om rekken te hâlden mei it substraat dat yn dit proses konsumearre is, brûkten de ûndersikers in kontrôlereaksje dy't grien ljocht útstjit.In buis dy't fan kleur feroaret fan grien nei blau jout in posityf resultaat oan.
De ûndersikers testen har platfoarm troch it ûntwikkeljen fan de RPA-LUNAS-assay, dy't detektearretSARS-CoV-2 RNAsûnder ferfeelsume RNA-isolaasje, en demonstrearre har diagnostyske prestaasjes op nasopharyngeale swabmonsters fanCOVIDpasjinten.RPA-LUNAS ûntdekte SARS-CoV-2 mei súkses binnen 20 minuten yn samples mei in RNA-virale lading sa leech as 200 eksimplaren / μL.
De ûndersikers leauwe dat har assay in protte oare firussen maklik en effektyf kin ûntdekke."RPA-LUNAS is oantreklik foar testen fan ynfeksjesykten op it punt fan soarch," skreau se.